无论气相还是液相,色谱柱都是分离的核心。液相色谱柱的固定相可以说是五花八门,有C18,C8,C4,苯基柱,氰基柱,氨基柱等等。色谱柱使用的好坏,直接关系到分析分离的结果,我们都知道氨基柱有使用寿命短等问题,今天在这里给大家带来氨基柱的使用维护指南,希望通过更好的维护使用,让我们手中的色谱柱发挥出更大的作用。


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说起氨基柱,大家最熟悉的是拿它来做糖的分析。这是一个典型的HILIC模式。除了HILIC模式以外,氨基柱还可以用做正相和弱阴离子交换两种模式。可以说应用范围和模式非常广。


ThermoFisher色谱柱系列大家族中拥有三款氨基键合相的色谱柱,分别是Hypersil GOLD Amino、Syncronis Amino和Hypersil APS-2。有人会问,都是氨基柱,他们的区别又在哪里呢?


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让小编来给大家一一做个介绍。Hypersil Gold Amino这款氨基柱具有更对称的峰型,在生产工艺上有更致密的键合技术,硅胶表面残存的硅醇基数量最低。Syncronis Amino这款氨基柱金属杂质含量在同类色谱柱中最低,能够带来更高的柱效,而Hypersil APS-2这款氨基柱在分离多组分化合物时更具优势,并且在美国药典和欧洲药典中多有应用。说了这么多我们看看下面该如何使用维护。


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保存液


(Gold Amino和Syncronis Amino)出厂保存液为乙醇,APS-2柱出厂保存液为:异辛烷:乙醇:水=85:14.7:0.3,新色谱柱如果使用反相流动相条件,请充分置换色谱柱内正相溶剂。


活化


新色谱柱如果使用HILIC模式,使用前请使用异丙醇小流速过夜平衡色谱柱。流速建议0.1mL/min,之后再转换到100%乙腈冲洗20柱体积,然后转换到和流动相相同比例的不含盐的乙腈水体系冲洗20柱体积。


冲洗


用乙腈:水=60:40条件对色谱柱进行清洗,清洗时,不建议水相比例超过40%,过高使用水相容易导致键合相水解。


色谱柱再生


当色谱柱经过长时间使用,柱效很低时,可以对色谱柱再生处理,用乙腈:水(水中加入0.05%氨水)=60:40条件冲洗30柱体积。


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保存


一个月以内的保存,请使用与所选用流动相组成相同的有机溶剂和水的混合溶液(不含酸、无机盐)进行置换,请避免只用水进行置换;一个月以上的长期保存,在进行了上述处理之后,请用乙腈置换并保存。


氨基柱糖类的分析


请设定乙腈/水的流动相条件。乙腈的浓度越高,则对糖的保留能力越强。

若采用含甲醇或缓冲盐的流动相,峰会展宽。

若将糖的水溶液作为样品注入,谱峰会展宽。请使用含乙腈50%以上的溶剂来配制糖类样品。

曾在酸性条件下使用过的色谱柱,糖类分析的保留时间、峰形会


离子型物质的分析


请设定乙腈/磷酸缓冲液且具有一定pH值的流动相条件。

考察流动相条件时,按照pH由高到低的顺序进行考察。如果曾经在低pH下使用,填料的表面将无法回到初始状态。

有时需要长时间平衡色谱柱(24小时以上)。平衡所需时间与通液量和盐浓度紧密相关,因此,时间紧急时请提高流速,或pH不变而增加流动相的盐浓度来进行平衡。





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